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遗传毒理实验试剂盒操作注意事项
发布时间:2019-08-01 阅读:90
    实验操作中,每一个小细节都决定着试验的成功与否,要想实验成功,除了要严格按照步骤操作以外,还要注意相应的事项,下面就随小编一起来了解下遗传毒理实验试剂盒操作注意事项吧!
    一、ELISA试剂的准备
    按试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂。ELISA中用的蒸馏水或去离子水,包括用于洗涤的,应为新鲜的和高质量的。自配的缓冲液应用pH计测量较正。从冰箱中取出的试验用试剂应待温度与室温平衡後使用(非常重要,特别是酶标板要平衡到室温才能把铝箔袋的口打开)。试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保存。
    二、加样
    在ELISA中一般有3到四次加样步聚,即加标本,加酶结合物,加底物。加样时应将所加物加在LEISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可溅出,不可产生气泡。
    加标本一般用微量加样器,按规定的量加入板孔中。每次加标本应更换吸嘴,以免发生交叉污染,也可用一次性的定量塑料管加样。有此测定(如间接法ELISA)需用稀释的血清,可在试管中按规定的稀释度稀释後再加样。也可在板孔中加入稀释液,再在其中加入血清标本,然後在微型震荡器上震荡1分钟以保证混和。加酶结合物应用液和底物应用液时可用定量多道加液器,使加液过程迅速完成。
    三、ELISA实验操作中的温育
    在ELISA中一般有两次抗原抗体反应,即加标本和加酶结合物後。抗原抗体反应的完成需要有一定的温度和时间,这一保温过程称为温育。
为什么ELISA反应总是需要一定时间的温育:
    温育的温度:根据酶的活力,一般是室温温育或者37度温育;
    保温的方式:室温温育可以在有空调的房间里(20-25度);或者在控温的培养箱里;温度不能过低或者过高;37度温育可以在水浴箱里,或者在培养箱(恒温箱),如果在恒温箱里温育,zui好放在湿合里进行温育;
    注意:为了防止在温育过程中水分的蒸发,请温育时贴上膜(如果试剂盒中没有,可以用保鲜膜替代);
    温育时注意温度的控制,仪器在之前用温度计校正过温度;空调房间应选择比较恒温的地方;
    四、洗涤
    洗涤在ELISA过程中虽不是一个反应步骤,但却也决定着实验的成败。ELSIA就是靠洗涤来达到分离游离的和结合的酶标记物的目的。通过洗涤以清除残留在板孔中没能与固相抗原或抗体结合的物质,以及在反应过程中非特异性地吸附于固相载体的干扰物质。聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的,而在洗涤时又应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来。可以说在ELISA操作中,洗涤是zui主要的关键技术,应引起操作者的高度重视,操作者应严格按要求洗涤,不得马虎。
    洗涤的方式有自动洗涤和手工操作两种,手工操作过程如下:
    a、吸干或甩干孔内反应液;
    b、用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔後,即甩去);
    c、浸泡,即将洗涤液注满板孔,放置1-2分钟,间歇摇动,浸泡时间不可随意缩短;
    d、吸干孔内液体。吸干应彻底,可用水泵或真空泵抽吸,也可甩去液体後在清洁毛巾或吸水纸上拍干;
    e、重复操作c和d,洗涤3-4次(或按说明规定)。

 
 

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